XPC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401499-ACT

O XPC humano codifica um fator de reconhecimento de danos no DNA que inicia o reparo por excisão de nucleotídeos do genoma global (GG-NER) ao detectar lesões que distorcem a hélice, como fotoprodutos induzidos por UV e adutos químicos volumosos. O XPC atua em conjunto com RAD23B e CETN2 para promover a verificação da lesão e o recrutamento de componentes NER a jusante, sustentando a estabilidade do genoma, a integridade da forquilha de replicação e a sinalização de checkpoints do ciclo celular. A interrupção do reparo dependente de XPC eleva a carga mutacional e altera as respostas celulares ao estresse genotóxico, associando a disfunção de XPC à predisposição ao câncer e a fenótipos de fotossensibilidade. Como um nó central nas redes de reparo do DNA, a expressão de XPC é frequentemente avaliada em estudos de mutagênese, carcinogênese ambiental e crosstalk entre vias de reparo.

XPC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XPC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XPC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XPC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XPC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XPC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XPC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XPC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XPC em células tumorais com expressão de XPC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.