xCT Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401920-ACT

O gene humano SLC7A11 codifica a xCT, a subunidade de cadeia leve do sistema xC⁻ que medeia a importação de cistina independente de sódio em troca de glutamato intracelular. Ao fornecer cistina para a síntese de glutationa, a xCT sustenta a homeostase redox celular, a detoxificação de espécies reativas de oxigênio e o acoplamento metabólico entre o transporte de aminoácidos e a capacidade antioxidante. O SLC7A11 é regulado por programas responsivos ao estresse, como o NRF2 e a sinalização integrada do estresse, o que o relaciona à sensibilidade à ferroptose e ao metabolismo mais amplo de tióis. A atividade desregulada de xCT tem sido associada a alterações no controle do estresse oxidativo e à reprogramação metabólica observadas em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia tumoral e processos neuroinflamatórios.

xCT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC7A11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

xCT O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC7A11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC7A11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de xCT. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC7A11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de xCT no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via xCT em células tumorais com expressão de SLC7A11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.