VEZF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423670

Panoramica

Vezf1 codifica VEZF1, un fattore di trascrizione a dita di zinco arricchito in contesti endoteliali vascolari ed ematopoietici, che regola programmi di espressione genica necessari per l’angiogenesi embrionale e il patterning vascolare. VEZF1 contribuisce al controllo della differenziazione endoteliale, della gemmazione dei vasi e del mantenimento dell’integrità vascolare coordinando reti trascrizionali legate alla migrazione cellulare, al rimodellamento della matrice extracellulare e alle vie di segnalazione dello sviluppo. Un’alterata attività di Vezf1 è stata associata, in modelli murini, a difetti nella formazione dei vasi sanguigni e a letalità durante lo sviluppo; i suoi ruoli regolatori lo rendono quindi rilevante per lo studio di malformazioni vascolari e della compromessa vascolarizzazione dei tessuti. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, VEZF1 rappresenta anche un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare il controllo trascrizionale della specificazione della linea endoteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VEZF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vezf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vezf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vezf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VEZF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vezf1 per lo studio della segnalazione di VEZF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vezf1 critici per la funzione di VEZF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vezf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VEZF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VEZF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vezf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VEZF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VEZF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vezf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vezf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.