UTF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423632

Panoramica

Il gene murino *Utf1* codifica UTF1, un regolatore trascrizionale associato alla cromatina, arricchito nelle cellule staminali embrionali pluripotenti e nelle prime linee cellulari embrionali. UTF1 contribuisce al mantenimento dello stato indifferenziato modulando programmi trascrizionali legati all’autorinnovamento e all’impegno di linea, includendo interazioni con meccanismi epigenetici che determinano l’accessibilità dei promotori e la produzione di RNA. La sua espressione è strettamente accoppiata alle reti di pluripotenza ed è comunemente utilizzata come indicatore molecolare dell’identità delle cellule staminali e dell’efficienza di riprogrammazione. Un’attività deregolata di *Utf1*/UTF1 è quindi rilevante in modelli di difetti dello sviluppo e di dedifferenziazione oncogenica, in cui possono emergere stati di espressione genica simili alla pluripotenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UTF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Utf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Utf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Utf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UTF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Utf1 per lo studio della segnalazione di UTF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Utf1 critici per la funzione di UTF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Utf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UTF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Utf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UTF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UTF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Utf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Utf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.