UTF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423632

Descripción general

Mouse Utf1 codifica UTF1, un regulador transcripcional asociado a la cromatina, enriquecido en células madre embrionarias pluripotentes y en linajes embrionarios tempranos. UTF1 contribuye al mantenimiento del estado indiferenciado al modular programas transcripcionales vinculados a la autorrenovación y al compromiso de linaje, incluidas interacciones con mecanismos epigenéticos que determinan la accesibilidad de los promotores y la producción de ARN. Su expresión está estrechamente acoplada a las redes de pluripotencia y se utiliza comúnmente como indicador molecular de la identidad de las células madre y de la eficiencia de reprogramación. Por ello, la actividad desregulada de Utf1/UTF1 es relevante en modelos de defectos del desarrollo y de desdiferenciación oncogénica, donde pueden surgir estados de expresión génica similares a la pluripotencia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UTF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Utf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Utf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Utf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UTF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Utf1 para la investigación de la señalización de UTF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Utf1 críticos para la función de UTF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Utf1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UTF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UTF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Utf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UTF1 (m) y el plásmido HDR UTF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Utf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Utf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.