Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400381-ACT

SCGB1A1 codifica a uteroglobina (também conhecida como CC10), um membro secretado da família das secretoglobinas produzido principalmente por células club das vias aéreas e por outros epitélios mucosos. Esta pequena proteína homodimérica contribui para a homeostase epitelial ao modular a sinalização inflamatória, limitar o stresse oxidativo e influenciar o metabolismo de fosfolípidos e eicosanoides no líquido de revestimento da superfície das vias aéreas. A expressão de SCGB1A1 está estreitamente ligada a programas de diferenciação epitelial e é frequentemente utilizada como marcador de identidade de células club e de remodelação das vias aéreas. Alterações nos níveis de SCGB1A1 têm sido associadas a condições crónicas inflamatórias das vias aéreas e a respostas a lesão epitelial, tornando-o relevante para estudos da função da barreira mucosa e da regulação inflamatória.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCGB1A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCGB1A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCGB1A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCGB1A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 em células tumorais com expressão de SCGB1A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.