Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400381-ACT

SCGB1A1 kodiert Uteroglobin (auch als CC10 bekannt), ein sezerniertes Mitglied der Secretoglobin-Familie, das vor allem von Club-Zellen der Atemwege und anderen mukosalen Epithelien produziert wird. Dieses kleine homodimere Protein trägt zur Homöostase des Epithels bei, indem es inflammatorische Signalwege moduliert, oxidativen Stress begrenzt und den Phospholipid- und Eikosanoid-Stoffwechsel in der Flüssigkeit auf der Oberfläche der Atemwege beeinflusst. Die Expression von SCGB1A1 ist eng an Programme der epithelialen Differenzierung gekoppelt und wird häufig als Marker der Club-Zell-Identität und des Airway-Remodelings verwendet. Veränderte SCGB1A1-Spiegel wurden mit chronisch entzündlichen Atemwegserkrankungen und epithelialen Verletzungsantworten in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Funktion der mukosalen Barriere und zur Regulation von Entzündungen relevant macht.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCGB1A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCGB1A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCGB1A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Uteroglobin/SCGB1A1/CC10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCGB1A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Uteroglobin/SCGB1A1/CC10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Uteroglobin/SCGB1A1/CC10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCGB1A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.