USP47 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403157-LAC

USP47 (ubiquitin specific peptidase 47) è un enzima umano deubiquitinante che rimuove l’ubiquitina dai substrati proteici per modularne stabilità, localizzazione e output di segnalazione. Intervenendo sul turnover proteico dipendente dall’ubiquitina, USP47 contribuisce alla proteostasi e influenza vie legate alla segnalazione del danno al DNA, al controllo del ciclo cellulare e alle risposte allo stress attraverso la regolazione delle dinamiche di ubiquitinazione. Reti di deubiquitinazione alterate che coinvolgono USP47 sono state associate a crescita deregolata e a programmi di mantenimento del genoma disfunzionali osservati in molteplici contesti patologici, sostenendo l’interesse a studiarlo come nodo nei circuiti associati al sistema ubiquitina–proteasoma e ai meccanismi di riparazione. Studi funzionali valutano comunemente come la deubiquitinazione dipendente da USP47 rimodelli i programmi trascrizionali e l’attività delle vie di segnalazione in condizioni basali o dopo una sfida genotossica.

Le particelle di attivazione lentivirale USP47 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di USP47 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale USP47 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione USP47, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di USP47. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo USP47 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.