Particules Lentivirales d'Activation (m) USP34: sc-421760-LAC

Usp34 code l’enzyme déubiquitinante USP34, une protéase spécifique de l’ubiquitine qui remanie les chaînes de polyubiquitine afin de contrôler la stabilité des protéines et l’amplitude des signaux. USP34 a été associée à la régulation de voies clés, notamment la signalisation Wnt/β-caténine, ainsi qu’à d’autres processus dépendants de l’ubiquitine qui influencent les programmes transcriptionnels, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire. Par ses effets sur la protéostasie et la transduction du signal, une activité altérée d’USP34 est étudiée dans des contextes de phénotypes du développement et de dérégulations, liées à des maladies, des voies de croissance et de différenciation. USP34 chez la souris constitue un système génétiquement facilement manipulable pour explorer des mécanismes de déubiquitination conservés en physiologie normale et dans des états cellulaires pertinents pour la maladie.

Les particules d'activation lentivirales USP34 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Usp34 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales USP34 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Usp34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de USP34. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Usp34 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.