USP22 Plasmide Double Nickase (h): sc-403660-NIC

L’USP22 umano codifica una proteasi specifica per l’ubiquitina che funge da modulo deubiquitinante del complesso coattivatore trascrizionale SAGA, dove rimuove l’ubiquitina dall’istone H2B e da ulteriori substrati per modulare l’accessibilità della cromatina e l’espressione genica. Attraverso queste attività, USP22 contribuisce a coordinare programmi trascrizionali legati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno del DNA e al mantenimento della proteostasi. USP22 è stato associato a firme trascrizionali oncogeniche e a stati di differenziamento alterati in molteplici tipi di tumore, rendendolo un bersaglio comune per studi meccanicistici sulla regolazione epigenetica e il controllo della trascrizione. Il suo ruolo all’intersezione tra segnalazione mediata dall’ubiquitina e rimodellamento della cromatina sostiene inoltre la ricerca su come la deubiquitinazione influenzi la stabilità del genoma e le vie di risposta adattativa allo stress.

USP22 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus USP22 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di USP22. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di USP22. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con USP22 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.