USP17L2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417603-ACT

USP17L2 (Ubiquitin-spezifische Peptidase 17, ähnliches Familienmitglied 2) ist ein menschliches Deubiquitinierungsenzym, das an der Regulation der Proteinstabilität und der Signaldynamik beteiligt ist, indem es Ubiquitin von Zielsubstraten entfernt. Als Bestandteil des Ubiquitin-Proteasom-Systems werden Mitglieder der USP17-Familie mit der Kontrolle der Zellzyklusprogression, der Rezeptor- und Kinase-Signalübertragung sowie der Modulation angeborener Immun- und Entzündungsreaktionen durch eine ubiquitinabhängige Feinabstimmung von Signalwegen in Verbindung gebracht. Veränderte Deubiquitinierung kann MAPK/ERK- und NF-κB-assoziierte Programme umgestalten und dadurch Proliferation, Stressantworten und transkriptionelle Outputs beeinflussen. Eine Fehlregulation von Ubiquitin-Signalnetzwerken, zu denen USP17-Paraloge gehören, wird in der Krebsbiologie und bei immunbezogenen Krankheitsmechanismen häufig als kontextabhängiger Beitrag zu aberranter zellulärer Signalübertragung untersucht.

USP17L2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen USP17L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

USP17L2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des USP17L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der USP17L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen USP17L2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native USP17L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von USP17L2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des USP17L2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem USP17L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.