UMPS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423609

Panoramica

Umps codifica la uridina monofosfato sintasi (UMPS), un enzima bifunzionale che catalizza le fasi terminali della biosintesi de novo delle pirimidine, convertendo l’orotato in UMP tramite le attività di orotato fosforibosiltransferasi e di orotidina-5′-fosfato decarbossilasi. UMPS sostiene l’omeostasi dei pool nucleotidici necessaria per la replicazione del DNA, la sintesi dell’RNA e la progressione del ciclo cellulare, collegando il metabolismo delle pirimidine alla capacità proliferativa e alla stabilità del genoma. L’alterazione della funzione di UMPS influisce indirettamente sulle reti metaboliche del carbonio a un atomo e accoppiate al folato, attraverso una modifica della domanda di nucleotidi, e può rimodellare le risposte cellulari allo stress replicativo. La deregolazione delle vie di sintesi delle pirimidine è di ampia rilevanza per gli studi sui meccanismi delle malattie metaboliche e sui fenotipi proliferativi nei sistemi mammiferi, inclusi i modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UMPS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Umps in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Umps insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Umps a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UMPS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Umps per lo studio della segnalazione di UMPS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Umps critici per la funzione di UMPS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Umps per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UMPS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UMPS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Umps. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UMPS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UMPS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Umps per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Umps definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.