Plásmido Doble Nickase (h) UBC9: sc-400859-NIC

UBE2I codifica UBC9, la única enzima E2 conjugadora de SUMO que transfiere SUMO a las proteínas diana para regular la estabilidad proteica, la localización subcelular y las interacciones macromoleculares. A través de la SUMOilación, UBC9 influye en la señalización y reparación del daño en el ADN, la progresión del ciclo celular, la organización de la cromatina, los programas transcripcionales y el transporte nucleocitoplasmático, integrando vías de respuesta al estrés con la proteostasis. La alteración de la SUMOilación dependiente de UBC9 se ha relacionado con un mantenimiento desregulado del genoma y un control transcripcional modificado, y con frecuencia se observa una actividad aberrante de la vía de SUMO en la biología del cáncer y en fenotipos de estrés celular asociados a la neurodegeneración. Como nodo central en la cascada de SUMO, UBC9 sirve como un punto de entrada útil para diseccionar la regulación dependiente de SUMO de sustratos clave y la comunicación cruzada entre vías.

UBC9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UBE2I en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UBE2I. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UBE2I. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UBE2I alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.