UBC9 Plasmide Double Nickase (h): sc-400859-NIC

UBE2I codifica UBC9, l’unico enzima E2 di coniugazione della SUMO, che trasferisce SUMO alle proteine bersaglio per regolare la stabilità proteica, la localizzazione subcellulare e le interazioni macromolecolari. Attraverso la SUMOilazione, UBC9 influenza la segnalazione e la riparazione del danno al DNA, la progressione del ciclo cellulare, l’organizzazione della cromatina, i programmi trascrizionali e il trasporto nucleo-citoplasmatico, integrando le vie responsive allo stress con la proteostasi. Alterazioni della SUMOilazione dipendente da UBC9 sono state associate a una disregolazione del mantenimento del genoma e a un controllo trascrizionale modificato, e un’attività aberrante della via della SUMO è frequentemente osservata nella biologia del cancro e nei fenotipi di stress cellulare associati alla neurodegenerazione. In quanto nodo centrale della cascata SUMO, UBC9 rappresenta un punto di accesso utile per analizzare la regolazione SUMO-dipendente di substrati chiave e il crosstalk tra vie di segnalazione.

UBC9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus UBE2I nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di UBE2I. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di UBE2I. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con UBE2I interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.