U2AF35 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404986-ACT

ヒトのU2AF1は、3′スプライス部位を認識し、スプライソソーム形成時にU2 snRNPのリクルートを助けるU2補助スプライシング因子の中核構成要素であるU2AF35をコードする。U2AF35はU2AF2（U2AF65）と複合体を形成し、ポリピリミジントラクトやスプライス接合部の特徴と相互作用することで、mRNAアイソフォームの産生、転写産物の安定性、タンパク質多様性を規定する選択的スプライシングの決定に寄与する。U2AF1依存的なスプライシング・プログラムは、RNAプロセシング、転写との共役、細胞周期制御とも交差しており、転写後遺伝子制御における重要なハブとなっている。U2AF1の反復的な変異やスプライシング異常のシグネチャーは、血液悪性腫瘍の生物学的特性や、より広範なRNAスプライシング経路の攪乱と関連しており、スプライソソーム機能や疾患関連のスプライシング変化を解明する機構研究における有用性を裏付けている。

U2AF35 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性U2AF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

U2AF35 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における U2AF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はU2AF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性U2AF35の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のU2AF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるU2AF35依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびU2AF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるU2AF35経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。