TSG-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423437

Panoramica

Tnfaip6 codifica la proteina 6 indotta dal fattore di necrosi tumorale‑α (TSG‑6), una proteina secreta legante l’ialuronano che rimodella la matrice extracellulare durante l’infiammazione e il danno tissutale. TSG‑6 catalizza il trasferimento delle catene pesanti dall’inibitore inter‑α all’ialuronano, promuovendo la formazione di matrici stabili ricche di HA che influenzano l’adesione dei leucociti, la migrazione cellulare e la risoluzione delle risposte infiammatorie. Nei sistemi murini, TNFAIP6 è rapidamente indotta a valle di segnali pro‑infiammatori quali TNF/NF‑κB e modula l’attività delle chemochine, le reti di proteasi e l’organizzazione della matrice. Una biologia TSG‑6/HA disregolata è stata collegata a modelli di artrite, infiammazione polmonare e intestinale, riparazione delle ferite e fibrosi, supportandone l’uso come nodo meccanicistico che connette la segnalazione citochinica alla dinamica della ECM.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSG-6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfaip6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfaip6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfaip6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSG-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfaip6 per lo studio della segnalazione di TSG-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfaip6 critici per la funzione di TSG-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfaip6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSG-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSG-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfaip6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSG-6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSG-6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfaip6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfaip6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.