TRPM8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401744-ACT

TRPM8（transient receptor potential cation channel subfamily M member 8）は、低温およびメントールに感受性を示す、カルシウム透過性のイオンチャネルであり、膜の興奮性と細胞内Ca2+シグナル伝達を制御します。ヒト細胞では、TRPM8の活性が感覚の伝達、浸透圧および温度刺激への応答性、ならびにCa2+依存的な転写制御やキナーゼシグナルに連動する下流経路に影響します。TRPM8の発現や機能の変化は、神経シグナル伝達や上皮細胞の挙動の変化と関連づけられており、がん生物学、疼痛・感覚障害、炎症関連プロセスの文脈でしばしば研究されています。細胞膜上のチャネルとしてTRPM8は、イオンチャネル依存的な細胞状態の制御、遊走、刺激誘発性シグナル伝達ダイナミクスを解析するうえで、扱いやすい標的（ノード）となります。

TRPM8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPM8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPM8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPM8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPM8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPM8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPM8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPM8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPM8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPM8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。