TRPM5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403223-ACT

TRPM5は、細胞内Ca2+シグナルを膜の脱分極へと結び付ける、一価陽イオン透過性のカルシウム活性化チャネルをコードしており、TRPメラスタチン（TRPM）ファミリーに属します。味覚受容細胞における化学感覚シグナル伝達の主要なメディエーターであり、GPCR–PLCβ2–IP3–Ca2+経路の下流で電気的興奮性を調節することでシグナル増幅にも寄与します。TRPM5の活性は、特定の上皮系および内分泌系の文脈において、刺激依存的な分泌や興奮性に影響し、Ca2+動態を細胞の応答プログラムと結び付けます。TRPM5の発現量やチャネル機能の変化は、ヒト組織における感覚表現型に加え、より広範な代謝・炎症シグナル状態との関連でも検討されています。

TRPM5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPM5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPM5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPM5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPM5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPM5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPM5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPM5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPM5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPM5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。