TRPC5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403745-NIC

TRPC5（transient receptor potential cation channel subfamily C member 5）は、Ca2+透過性をもつ非選択性陽イオンチャネルをコードしており、細胞外・細胞内のさまざまな刺激を感知して膜興奮性やカルシウム依存性シグナル伝達を調節します。ヒト細胞では、TRPC5はGPCRおよび受容体型チロシンキナーゼ経路の下流で起こる受容体作動性カルシウム流入に寄与し、PLCシグナル、ホスホイノシチド代謝、さらにNFATやMAPKといった下流の転写プログラムと連関します。TRPC5の活性は、Ca2+依存性エフェクターを介して細胞骨格ダイナミクス、細胞移動、バリア機能に影響し、チャネルのゲーティングをメカノケミカル応答へと結び付けます。TRPC5シグナルの破綻は、神経生物学、腎・心血管生理、細胞ストレス応答に関連する状況で報告されており、疾患関連モデルにおける経路解析の標的として有用です。

TRPC5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TRPC5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TRPC5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TRPC5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TRPC5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。