TRPC3/6/7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403740

Panoramica

TRPC3 è un canale cationico non selettivo permeabile al Ca2+ della sottofamiglia TRPC3/6/7, che collega la segnalazione della fosfolipasi C attivata dai recettori alla depolarizzazione di membrana e all’ingresso di calcio intracellulare. L’attività del canale è regolata dal diacilglicerolo e integra segnali a valle delle vie dei GPCR e dei recettori tirosin-chinasici, modulando trascrizione dipendente dal Ca2+, rimodellamento del citoscheletro, secrezione e contrattilità. I complessi di canali contenenti TRPC3 contribuiscono all’eccitabilità neuronale e alla segnalazione sinaptica, nonché all’omeostasi del calcio nella muscolatura liscia e nel cuore tramite cross-talk con le vie della calcineurina/NFAT e delle MAPK. La deregolazione dell’asse TRPC3/6/7 è stata associata a segnali di Ca2+ aberranti in contesti di malattie cardiovascolari e neurodegenerative ed è spesso studiata in modelli di ipertrofia, fibrosi e stress eccitotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC3/6/7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRPC3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRPC3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRPC3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPC3/6/7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRPC3 per lo studio della segnalazione di TRPC3/6/7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRPC3 critici per la funzione di TRPC3/6/7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRPC3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRPC3/6/7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRPC3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRPC3/6/7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRPC3/6/7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRPC3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRPC3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.