Trp7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408046-ACT

TRPM2（Trp7とも呼ばれる）は、ADPリボースによって活性化され、細胞内の酸化ストレスによって調節される、TRPファミリーに属するCa2+透過性の非選択的カチオンチャネルをコードする。TRPM2を介したCa2+流入は、レドックスシグナルをミトコンドリア機能、サイトカインおよびケモカイン産生、インフラマソーム関連応答、ならびにアポトーシスやネクロプトーシスといった細胞死プログラムを含む下流過程へと結び付ける。このチャネルは、NAD+代謝およびPARP依存性シグナル伝達からの入力を統合し、カルシウム恒常性とストレス適応的な転写応答の形成に寄与する。TRPM2活性の破綻は、炎症性および神経変性の機序、虚血再灌流障害の生物学、腫瘍関連微小環境におけるシグナル伝達に関与すると示唆されており、経路解析モデルにおける重要性を支持している。

Trp7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPM2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Trp7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPM2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPM2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Trp7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPM2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTrp7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPM2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTrp7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。