tropomodulin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405617

Panoramica

TMOD3 codifica la tropomodulina 3, una proteina che cappuccia l’estremità “pointed” dei filamenti di actina e ne regola lunghezza e stabilità, sostenendo l’organizzazione dell’actina corticale, la forma cellulare e le proprietà meccaniche. Modulando la dinamica dell’actina, TMOD3 contribuisce a processi di rimodellamento del citoscheletro quali migrazione cellulare, adesione e citocinesi, e interagisce funzionalmente con vie che governano il traffico di membrana e la contrattilità actomiosinica. Un’alterata regolazione dell’actina è stata implicata in diversi contesti patologici in cui l’organizzazione del citoscheletro è compromessa, inclusi l’invasione delle cellule tumorali e la disfunzione delle cellule ematologiche, rendendo TMOD3 un nodo utile per lo studio di fenotipi dipendenti dal citoscheletro. TMOD3 è inoltre rilevante per investigare l’architettura delle cellule eritroidi e immunitarie, dove un controllo preciso dei filamenti di actina è necessario per la normale funzione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMOD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMOD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMOD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina tropomodulin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMOD3 per lo studio della segnalazione di tropomodulin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMOD3 critici per la funzione di tropomodulin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMOD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal tropomodulin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal tropomodulin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMOD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal tropomodulin 3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR tropomodulin 3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMOD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMOD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.