TRAIL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418124

Panoramica

TNFSF10 codifica il ligando inducente apoptosi correlato al TNF (TRAIL), una citochina transmembrana di tipo II che può essere rilasciata per via proteolitica come ligando solubile. TRAIL si lega ai recettori della morte e avvia l’apoptosi estrinseca tramite l’attivazione di caspasi-8/10 dipendente da FADD, con un crosstalk a valle verso l’amplificazione mitocondriale e una modulazione da parte delle vie di segnalazione NF-κB e MAPK. Attraverso queste vie, TRAIL contribuisce alla sorveglianza immunitaria, alla regolazione dell’infiammazione e alle decisioni sul destino cellulare che influenzano l’omeostasi tissutale. La disregolazione della segnalazione TNFSF10/TRAIL è stata associata a una sensibilità alterata all’apoptosi e a fenotipi di evasione immunitaria osservati in diversi contesti di ricerca su cancro e malattie infiammatorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAIL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNFSF10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNFSF10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNFSF10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAIL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNFSF10 per lo studio della segnalazione di TRAIL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNFSF10 critici per la funzione di TRAIL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNFSF10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAIL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRAIL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNFSF10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAIL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRAIL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNFSF10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNFSF10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.