tPA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400922-ACT

ヒトPLATは、組織型プラスミノゲンアクチベーター（tPA）をコードしている。tPAは分泌型のセリンプロテアーゼで、プラスミノゲンをプラスミンへ変換することで線溶および細胞外マトリックスのプロテオリシスを調節する。プラスミン産生を介して、tPAは細胞周囲のリモデリング、細胞遊走、血管ホメオスタシスに影響を及ぼし、凝固バランスやプロテアーゼ活性化シグナル伝達を制御する経路と連携する。PLATの発現は内皮細胞をはじめとするさまざまな細胞種で厳密に制御されており、プラスミノゲン活性化系の破綻は血栓性・出血性の表現型、神経血管障害、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられている。これらの特性により、PLATはプロテアーゼネットワーク、血管生物学、状況依存的な細胞外プロテオリシスを研究する上で有用な標的となる。

tPA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLATの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

tPA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLAT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLAT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性tPAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLAT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるtPA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLAT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるtPA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。