TP53INP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405261-ACT

TP53INP2（tumor protein p53 inducible nuclear protein 2）はストレス応答性タンパク質で、オートファジーの制御や細胞内輸送に関与するとされており、オートファゴソーム形成の組織化や選択的オートファジー・プログラムの維持を担う役割が報告されています。また、細胞質から核へのシャトリングやオートファジー装置との相互作用とも関連づけられており、p53に関連したストレス応答を分解代謝的なリモデリングへと結びつけます。これらの機能を通じて、TP53INP2は栄養欠乏などのストレス下における細胞恒常性に影響し、生存、代謝、品質管理を司る経路に作用し得ます。TP53INP2が関与するオートファジーやストレスシグナルの破綻は、プロテオスタシスや代謝適応が乱れるがん生物学、神経変性、炎症性表現型の機序研究において重要です。

TP53INP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TP53INP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TP53INP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TP53INP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTP53INP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TP53INP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTP53INP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTP53INP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTP53INP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTP53INP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。