TMED9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407215

Panoramica

TMED9 (membro 9 della famiglia p24) codifica un recettore di carico transmembrana di tipo I della famiglia p24/TMED, localizzato prevalentemente nelle prime fasi della via secretoria. TMED9 partecipa al trasporto vescicolare dipendente da COPI e COPII, supportando la selezione del carico e il traffico tra reticolo endoplasmatico, compartimento intermedio RE–Golgi e Golgi, e contribuisce all’omeostasi degli organelli e al controllo qualità delle proteine. Attraverso questi ruoli, TMED9 influenza le dinamiche di secrezione e la distribuzione intracellulare di proteine di membrana e secrete, processi strettamente legati alle risposte allo stress del RE e alla proteostasi. Un’alterazione del traffico secretorio e del trasporto RE–Golgi è stata implicata in diverse malattie umane, inclusi i rimodellamenti della secrezione e i percorsi di adattamento allo stress associati al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMED9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMED9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMED9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMED9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMED9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMED9 per lo studio della segnalazione di TMED9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMED9 critici per la funzione di TMED9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMED9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMED9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMED9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMED9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMED9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMED9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMED9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMED9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.