TIP30 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406742-ACT

HTATIP2 codifica TIP30, un fattore con caratteristiche di oncosoppressore implicato nella regolazione trascrizionale, nella segnalazione apoptotica e nel controllo del traffico endocitico. TIP30 è stato collegato alla modulazione dell’internalizzazione di EGFR e degli output a valle delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando così proliferazione, migrazione e risposte allo stress cellulare. Un’alterazione dell’espressione di TIP30 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è associata a variazioni del potenziale metastatico e della resistenza all’apoptosi, a sostegno della sua ampia rilevanza negli studi delle reti di segnalazione oncogenica. In quanto prodotto genico umano, TIP30 viene inoltre utilizzato per indagare programmi trascrizionali dipendenti dal contesto e il crosstalk tra vie di segnalazione in sistemi modello di origine epiteliale e immunitaria.

TIP30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HTATIP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TIP30 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HTATIP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HTATIP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TIP30. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HTATIP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TIP30 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TIP30 nelle cellule tumorali con espressione di HTATIP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.