TIMP-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402560

Panoramica

TIMP4 codifica l’inibitore tissutale delle metalloproteinasi-4 (TIMP-4), un inibitore endogeno secreto che si lega alle metalloproteinasi della matrice e ne limita l’attività, regolando il turnover della matrice extracellulare (ECM). Modulando la proteolisi pericellulare, TIMP-4 influenza l’adesione e la migrazione cellulare, nonché i programmi di rimodellamento tissutale che interagiscono con la segnalazione ECM–integrine, i segnali infiammatori e la disponibilità di fattori di crescita. Un’espressione alterata di TIMP4 o uno squilibrio tra TIMP e MMP è spesso oggetto di studio in contesti di fibrosi, rimodellamento vascolare e dinamiche del microambiente tumorale, in cui composizione dell’ECM e attività proteasica plasmano i fenotipi cellulari. TIMP-4 partecipa anche al controllo del processamento proteasi-dipendente di molecole bioattive, rendendolo rilevante per la mappatura delle vie di segnalazione nella biologia della matrice e nella proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TIMP4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TIMP4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TIMP4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIMP-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TIMP4 per lo studio della segnalazione di TIMP-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TIMP4 critici per la funzione di TIMP-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TIMP4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TIMP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIMP-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TIMP4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TIMP-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIMP-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TIMP4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TIMP4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.