TIGAR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401390-NIC

O TIGAR humano (regulador da glicólise e da apoptose induzido por TP53) codifica uma proteína semelhante a uma frutose-2,6-bisfosfatase que reprograma o metabolismo celular ao reduzir a frutose-2,6-bisfosfato, suprimir o fluxo glicolítico e favorecer a atividade da via das pentoses fosfato. Ao aumentar a geração de NADPH, o TIGAR sustenta a homeostase redox e limita as espécies reativas de oxigénio (ROS), ligando o controlo metabólico a respostas ao stress, à apoptose e a programas de autofagia a jusante da sinalização de p53. O TIGAR tem sido estudado em contextos de reprogramação metabólica e adaptação ao stress oxidativo relevantes para a biologia do cancro e outras doenças em que o equilíbrio redox e a bioenergética influenciam o destino celular. Como regulador nodal na interseção entre a sinalização de p53, a glicólise e as defesas antioxidantes, o TIGAR constitui um alvo acessível para dissecar fenótipos dependentes do metabolismo em células humanas.

TIGAR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TIGAR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TIGAR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TIGAR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TIGAR interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.