Plasmide Double Nickase (h) TIGAR: sc-401390-NIC

Le TIGAR humain (TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator) code une protéine de type fructose-2,6-bisphosphatase qui reprogramme le métabolisme cellulaire en diminuant le fructose-2,6-bisphosphate, en supprimant le flux glycolytique et en favorisant l’activité de la voie des pentoses phosphates. En augmentant la production de NADPH, TIGAR contribue à l’homéostasie rédox et limite les espèces réactives de l’oxygène (ROS), reliant ainsi le contrôle métabolique aux réponses au stress, ainsi qu’aux programmes d’apoptose et d’autophagie en aval de la signalisation p53. TIGAR a été étudié dans des contextes de reprogrammation métabolique et d’adaptation au stress oxydant pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles où l’équilibre rédox et la bioénergétique influencent le destin cellulaire. En tant que régulateur nodal à l’intersection de la signalisation p53, de la glycolyse et des défenses antioxydantes, TIGAR constitue une cible accessible pour disséquer des phénotypes dépendants du métabolisme dans les cellules humaines.

TIGAR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TIGAR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TIGAR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TIGAR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TIGAR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.