TGase2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401543-ACT

Il gene umano **TGM2** codifica la transglutaminasi 2 (TGase2), un enzima multifunzionale dipendente dal Ca2+ che catalizza la reticolazione delle proteine e la poliammidazione e può anche agire come proteina di segnalazione legante il GTP. TGase2 regola il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare, la stabilizzazione della matrice extracellulare, l’autofagia e l’apoptosi, interfacciandosi con la segnalazione integrina/FAK, con programmi infiammatori legati a NF-κB e con vie di rimodellamento associate al TGF-β. Attraverso questi processi, un’attività alterata di TGase2 è stata associata a fibrosi e deposizione anomala di matrice, a stati infiammatori e a fenotipi di sopravvivenza e invasione delle cellule tumorali. L’ampia localizzazione subcellulare e le funzioni dipendenti dal contesto rendono TGM2 un nodo utile per studi meccanicistici delle risposte allo stress e del controllo del destino cellulare.

TGase2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGase2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGase2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGase2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGase2 nelle cellule tumorali con espressione di TGM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.