TFIIIC90 Double Nickaseプラスミド (h): sc-411269-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TFIIIC90 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TFIIIC90ダブルニカースプラスミド（h）およびTFIIIC90ダブルニカースプラスミド（h2）は、GTF3C4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TFIIIC90 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIIC90 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-411269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのGTF3C4はTFIIIC90をコードしており、これはtRNAなどRNAポリメラーゼIII（Pol III）によって転写される遺伝子に存在する内部プロモーター要素を認識するTFIIIC複合体の中核サブユニットである。Pol IIIのプレイニシエーション（転写開始前）複合体の組み立てを支え、さらにPol III座位におけるクロマチン構造の形成にも影響を与えることで、TFIIIC90は小分子RNAの恒常性、翻訳能、そしてより広範な転写ネットワークの協調に寄与する。TFIIIC依存的な制御は、反復配列での機能や、特定のゲノム文脈におけるバリア／インスレーター様機能を通じて、細胞増殖の制御、ストレス応答、ゲノムアーキテクチャとも交差する。Pol IIIの転写プログラムおよびTFIIIC構成要素の異常は、増殖性の表現型やRNA代謝の変化と関連づけられており、TFIIIC90はがん関連経路やリボスタシス（RNA恒常性）経路における機序解明研究の有用な標的となる。
TFIIIC90 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GTF3C4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GTF3C4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GTF3C4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GTF3C4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。