TFEC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406102

Panoramica

TFEC (transcription factor EC) codifica un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix con motivo leucine zipper della famiglia MiT/TFE, che si lega a motivi E-box per regolare programmi genici ristretti a specifiche linee cellulari. È studiato soprattutto nella biologia della linea mieloide e delle cellule pigmentarie, dove può influenzare lo stato di differenziamento e reti trascrizionali che intersecano la segnalazione immunitaria e le risposte allo stress cellulare. L’attività di TFEC contribuisce al controllo degli output trascrizionali coinvolti nell’identità cellulare e nell’adattamento ai segnali ambientali. Programmi trascrizionali deregolati della famiglia MiT/TFE, incluse le reti associate a TFEC, sono stati implicati in differenziamento aberrante e firme di espressione genica legate al cancro, a supporto di studi meccanicistici in contesti oncogenici e di immunobiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFEC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TFEC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TFEC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TFEC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFEC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TFEC per lo studio della segnalazione di TFEC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TFEC critici per la funzione di TFEC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TFEC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TFEC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TFEC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TFEC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TFEC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TFEC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TFEC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TFEC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.