TEF-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402607-LAC

TEAD1 codifica o TEF-1, um fator de transcrição com domínio TEA/ATTS que atua em parceria com YAP/TAZ para regular programas gênicos que controlam a proliferação, a sobrevivência, a diferenciação celular e o crescimento tecidual. O TEF-1 é um importante efetor nuclear da via Hippo e integra sinais provenientes da mecanotransdução, da sinalização por GPCR e da dinâmica do citoesqueleto para modular a atividade de enhancers e promotores. A transcrição desregulada dependente de TEAD1/TEF-1 tem sido associada a alterações no desenvolvimento e na regeneração de órgãos, e é frequentemente estudada no contexto da reprogramação transcricional dirigida por YAP/TAZ na biologia do câncer. A atividade de TEAD1 também é relevante para programas de expressão gênica no sistema cardiovascular e no músculo esquelético, o que o torna um alvo útil para investigar especificação de linhagem e transcrição responsiva ao estresse.

As Partículas de Ativação Lentivirais TEF-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TEAD1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TEF-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TEAD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TEF-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TEAD1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.