TCF7L2/TCF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400607-ACT

TCF7L2 (também conhecido como TCF4) codifica um fator de transcrição de ligação ao DNA do tipo high-mobility group (HMG) que atua como o principal efetor nuclear da sinalização canônica Wnt/β-catenina. Ao formar complexo com a β-catenina em elementos de resposta TCF/LEF, o TCF7L2 regula programas gênicos que controlam decisões de destino celular, proliferação, diferenciação e homeostase metabólica. Em tecidos humanos, a atividade de TCF7L2 influencia redes transcricionais endócrinas e epiteliais e é frequentemente estudada no contexto da regulação da glicose e do padrão de desenvolvimento. Alterações genéticas e de expressão em TCF7L2 têm sido associadas a características metabólicas e a múltiplos cânceres, sustentando sua ampla relevância para circuitos regulatórios ligados a doenças.

TCF7L2/TCF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCF7L2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCF7L2/TCF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCF7L2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCF7L2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCF7L2/TCF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCF7L2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCF7L2/TCF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCF7L2/TCF4 em células tumorais com expressão de TCF7L2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.