TBZF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417474

Panoramica

ZNF675 codifica la proteina umana TBZF, un presunto fattore di legame al DNA con dita di zinco implicato nella regolazione della trascrizione e nel mantenimento di programmi di espressione genica specifici dello stato cellulare. In quanto probabile regolatore nucleare, si prevede che TBZF influenzi processi associati alla cromatina, come l’attività di promotori/enhancer, la repressione o l’attivazione trascrizionale e il coordinamento di reti geniche a valle sensibili alla segnalazione. La disregolazione dei fattori di trascrizione a dita di zinco è spesso collegata ad alterazioni dei percorsi di differenziamento, proliferazione e risposta allo stress, rendendo ZNF675 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sul controllo della regolazione genica in fenotipi cellulari associati a malattia. Lo studio della funzione di TBZF può contribuire a chiarire come i circuiti trascrizionali si integrino con vie più ampie che governano la stabilità del genoma e l’omeostasi cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TBZF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZNF675 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZNF675 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZNF675 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TBZF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZNF675 per lo studio della segnalazione di TBZF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZNF675 critici per la funzione di TBZF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZNF675 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TBZF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TBZF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZNF675. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TBZF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TBZF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZNF675 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZNF675 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.