TBX20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404350-ACT

TBX20はT-box型転写因子をコードしており、発生期および成熟期の心筋において遺伝子制御ネットワークを協調的に統合することで、心臓系譜の規定と心室などの各心腔の成熟に中心的な役割を果たします。TBX20はNKX2-5、GATA4、MEF2ファミリー因子などの主要な心臓形成プログラムと連携し、心筋細胞の増殖・分化・電気伝導特性を制御する転写出力を調節します。これらの転写回路を介して、TBX20はサルコメアの構築、細胞外マトリックスのリモデリング、心臓形態形成を司る経路にも影響を与えます。TBX20の発現量や機能の変化は先天性心疾患や心筋症との関連が報告されており、心血管生物学における転写制御異常をモデル化するうえで有用な標的（ノード）となります。

TBX20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBX20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBX20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBX20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBX20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBX20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBX20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBX20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBX20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBX20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。