TBX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403078-ACT

TBX2 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che si lega al DNA tramite un dominio T-box conservato per coordinare programmi genici dello sviluppo e decisioni di destino cellulare. Nelle cellule umane, TBX2 regola reti trascrizionali che controllano proliferazione, elusione della senescenza e specificazione di linea, con ruoli documentati nella modulazione dei regolatori del ciclo cellulare e di vie associate alla differenziazione. Un’espressione aberrante di TBX2 è stata associata a crescita deregolata e a un patterning dello sviluppo alterato in diversi contesti tissutali, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dell’identità cellulare. La manipolazione sperimentale di TBX2 supporta ricerche meccanicistiche su programmi trascrizionali oncogenici, dinamiche epitelio–mesenchimali e crosstalk tra vie di segnalazione dello sviluppo.

TBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBX2 nelle cellule tumorali con espressione di TBX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.