TBR-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402507-ACT

TBR1 codifica il fattore di trascrizione della famiglia T-box TBR-1, un regolatore nucleare con ruoli essenziali nella differenziazione dei neuroni corticali, nella migrazione neuronale e nella formazione della connettività corticotalamica durante lo sviluppo neurologico umano. TBR-1 modula programmi di espressione genica a valle di segnali di sviluppo e di reti trascrizionali, incluse interazioni con fattori coinvolti nella specificazione della linea glutammatergica e nella maturazione sinaptica. Un’espressione o una funzione deregolata di TBR1 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi, con ricorrenti correlazioni con il disturbo dello spettro autistico e con compromissioni cognitive e del linguaggio correlate, attraverso un’alterata formazione dei circuiti neuronali. In quanto nodo di via che controlla identità e connettività neuronale, TBR-1 è ampiamente studiato per i meccanismi di controllo trascrizionale nei sistemi neurali in sviluppo e maturi.

TBR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBR-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBR-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBR-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBR-1 nelle cellule tumorali con espressione di TBR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.