TAZ Plasmide Double Nickase (m): sc-430168-NIC

Il gene murino Wwtr1 codifica il co-attivatore trascrizionale TAZ, un effettore chiave a valle della via Hippo che integra segnali meccanici, densità cellulare e dinamiche del citoscheletro per regolare programmi genici che controllano proliferazione, sopravvivenza e differenziamento. Attraverso interazioni con i fattori di trascrizione della famiglia TEAD, TAZ coordina la plasticità epitelio-mesenchimale, il comportamento delle cellule staminali/progenitrici e il controllo delle dimensioni degli organi. Un’attività di TAZ deregolata è associata ad alterazioni dell’omeostasi tissutale e a stati trascrizionali di tipo oncogenico, rendendo Wwtr1 un nodo ampiamente utilizzato per studiare le reti di controllo della crescita. Nei sistemi murini, la perturbazione di Wwtr1/TAZ è spesso sfruttata per analizzare il crosstalk tra segnali dello sviluppo e la regolazione trascrizionale dipendente dal contesto.

TAZ Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Wwtr1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Wwtr1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Wwtr1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Wwtr1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.