TAL2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423262-ACT

マウス Tal2 は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子 TAL2 をコードしており、DNA に結合する制御因子として、転写ネットワークを介して系譜決定や分化プログラムに影響を与えます。TAL2 の活性は、発生における中核的な遺伝子制御回路と交差しており、bHLH 因子がクロマチンのアクセス性と細胞状態の転換を協調的に制御する場に関与します。造血系および神経系の文脈では、TAL2 発現の破綻が異常な転写制御や腫瘍性の遺伝子発現シグネチャーと関連づけられており、形質転換に関わる経路を研究するための機構的な切り口として有用であることが示されています。核内転写因子である TAL2 は、上流の調節因子、下流標的、ならびに文脈依存的な遺伝子ネットワークの再配線を検討するための扱いやすいモデルとなります。

TAL2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tal2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAL2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tal2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTal2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTal2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTal2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。