TACC3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402461-ACT

Il TACC3 umano (transforming acidic coiled-coil containing protein 3) è un fattore centrosomiale e associato al fuso mitotico che coordina la dinamica dei microtubuli per sostenere l’assemblaggio del fuso mitotico, la segregazione dei cromosomi e una corretta progressione del ciclo cellulare. Attraverso interazioni con partner come la clatrina e chTOG, TACC3 contribuisce alla stabilizzazione dei microtubuli e all’integrità del fuso, collegando la sua funzione al controllo del checkpoint mitotico e alla stabilità genomica. Un’espressione deregolata o riarrangiamenti di TACC3 sono stati osservati in diversi contesti tumorali e vengono frequentemente studiati in relazione alla segnalazione proliferativa, all’instabilità cromosomica e a programmi mitotici alterati. Queste caratteristiche rendono TACC3 un nodo utile per studiare la biologia della divisione cellulare, i meccanismi dell’aneuploidia e le dipendenze di via associate alla rapida proliferazione.

TACC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TACC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TACC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TACC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TACC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TACC3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TACC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TACC3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TACC3 nelle cellule tumorali con espressione di TACC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.