Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SYT Plasmide Double Nickase (h): sc-401575-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SYT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SYT Double Nickase Plasmid (h) e il SYT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SS18. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SYT Antibody (D-3): sc-390615
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SYT Plasmide Double Nickase (h) | sc-401575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SYT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SS18 (SYT) codifica una subunità centrale del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) ATP-dipendente, che regola l’accessibilità della cromatina e la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II. Coordinando la comunicazione tra enhancer e promotore e programmi di espressione genica specifici di linea cellulare, SS18 contribuisce a controllare la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la definizione dei pattern di sviluppo. Un’alterata biologia di SS18 è fortemente implicata nel sarcoma sinoviale, in cui proteine di fusione derivate da traslocazioni di SS18 riorganizzano la composizione del complesso BAF e i suoi output trascrizionali. La disregolazione della cromatina associata a SS18 offre inoltre spunti per studi più ampi sul controllo epigenetico, sulle dipendenze trascrizionali oncogeniche e sull’organizzazione del genoma nelle cellule umane.
SYT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SS18 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SS18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SS18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SS18 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.