SYT Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401575-ACT

SS18, noto anche come SYT, codifica un co-regolatore trascrizionale nucleare che si associa ai complessi di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) per influenzare l’accessibilità di enhancer e promotori. Attraverso queste interazioni, SS18 contribuisce a coordinare programmi trascrizionali dipendenti dalla RNA polimerasi II, legati all’identità cellulare, alla differenziazione e alla proliferazione. SS18 è rilevante dal punto di vista patologico perché riarrangiamenti ricorrenti che coinvolgono SS18 possono riorganizzare la regolazione della cromatina e attivare in modo aberrante l’espressione genica in linee cellulari non appropriate, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle dipendenze trascrizionali oncogeniche. La sua funzione viene comunemente studiata nel contesto del rimodellamento della cromatina, del controllo dello stato epigenetico e della dinamica delle reti di fattori di trascrizione.

SYT Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SS18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SYT Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SS18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SS18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SYT. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SS18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SYT nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SYT nelle cellule tumorali con espressione di SS18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.