Synaptoporin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428189

Panoramica

Synpr codifica la sinaptoporina, una proteina di membrana delle vescicole sinaptiche arricchita nei terminali presinaptici dei neuroni di topo e appartenente alla famiglia delle sinaptofisina. La sinaptoporina contribuisce alla biogenesi e al riciclo delle vescicole sinaptiche, influenzando il rilascio di neurotrasmettitori e la plasticità sinaptica a breve termine attraverso un traffico dipendente dall’attività e l’accoppiamento tra endocitosi ed esocitosi. È spesso studiata nel contesto dei circuiti ippocampali e glutammatergici, in cui la dinamica delle vescicole modella l’eccitabilità della rete. Alterazioni nella composizione delle proteine presinaptiche delle vescicole, incluse le vie associate alla sinaptoporina, sono rilevanti per lo studio dei meccanismi delle malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptoporin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Synpr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Synpr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Synpr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Synaptoporin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Synpr per lo studio della segnalazione di Synaptoporin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Synpr critici per la funzione di Synaptoporin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Synpr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Synaptoporin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Synaptoporin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Synpr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Synaptoporin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Synaptoporin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Synpr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Synpr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.