SURF-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423219

Panoramica

Surf1 codifica SURF-1, una proteina conservata della membrana mitocondriale interna, necessaria per il corretto assemblaggio della citocromo c ossidasi (complesso IV) nella catena di trasporto degli elettroni. Coordinando la biogenesi del complesso IV, SURF-1 sostiene la fosforilazione ossidativa, il mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e un’efficiente produzione cellulare di ATP. L’alterazione della funzione di SURF1 è associata a una deficienza del complesso IV mitocondriale e a fenotipi neurodegenerativi simili alla sindrome di Leigh, evidenziandone l’importanza per i tessuti ad alto fabbisogno energetico. Nei modelli murini, la perturbazione di Surf1 è ampiamente utilizzata per studiare la proteostasi mitocondriale, il rimodellamento della catena respiratoria e la segnalazione responsiva allo stress associata a una bioenergetica compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Surf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Surf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Surf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SURF-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Surf1 per lo studio della segnalazione di SURF-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Surf1 critici per la funzione di SURF-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Surf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SURF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SURF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Surf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SURF-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SURF-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Surf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Surf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.