Sulfiredoxin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403023-ACT

SRXN1 codifica la sulfiredossina, un ossidoriduttasi ATP-dipendente che ripristina le perossiredossine iperossidate (Prx-SO2H) riportandole alla loro forma tiolica attiva, mantenendo l’attività perossidasica durante lo stress ossidativo. Preservando il ciclo funzionale delle perossiredossine, la sulfiredossina sostiene l’omeostasi redox e influenza vie di segnalazione sensibili alle ROS, incluse le risposte antiossidanti guidate da Nrf2/ARE e la modulazione a valle della segnalazione MAPK e NF-κB. L’attività di SRXN1 è associata all’adattamento cellulare in condizioni di ipossia, infiammazione e stress proteotossico, e un’espressione alterata è stata riportata in diversi contesti della biologia del cancro, della neurodegenerazione e della disfunzione metabolica, in cui lo squilibrio redox è una caratteristica chiave. Queste proprietà rendono SRXN1 un nodo utile per studiare la regolazione redox dei tioli, la riparazione del danno ossidativo e i programmi trascrizionali indotti dallo stress nelle cellule umane.

Sulfiredoxin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SRXN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sulfiredoxin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SRXN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SRXN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sulfiredoxin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SRXN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sulfiredoxin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sulfiredoxin nelle cellule tumorali con espressione di SRXN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.