SUGT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405128-ACT

SUGT1 (omologo di SGT1) codifica un co-chaperone conservato che collega l’attività di HSP90 all’assemblaggio e alla stabilità di complessi multiproteici, inclusi i componenti del cinetocore necessari per una corretta segregazione dei cromosomi. Nelle cellule umane, SUGT1 supporta la progressione del ciclo cellulare tramite il controllo del checkpoint mitotico e contribuisce al controllo di qualità legato al sistema ubiquitina–proteasoma coordinando la maturazione dei complessi proteici. Attraverso questi ruoli, SUGT1 è rilevante per le vie che regolano la stabilità del genoma, l’aneuploidia e le reti di segnalazione sensibili allo stress. La deregolazione della funzione o dell’espressione di SUGT1 è stata studiata in contesti in cui il controllo proliferativo e la proteostasi risultano alterati, offrendo un punto di ingresso meccanicistico per analizzare difetti della divisione cellulare e fenotipi associati al cancro.

SUGT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SUGT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SUGT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SUGT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SUGT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SUGT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SUGT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SUGT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SUGT1 nelle cellule tumorali con espressione di SUGT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.