Su[fu] Double Nickaseプラスミド (m): sc-423973-NIC

Sufu（Suppressor of Fused）は、Hedgehogシグナル伝達の主要な細胞内阻害因子をコードしており、GLI転写因子の働きを抑えることで、胚発生におけるパターン形成や組織恒常性の維持において、経路活性化の閾値設定に寄与します。マウス細胞では、Su[fu]はPTCH1/SMOの下流でGLIのプロセシング、核内局在、ならびに転写出力を制御し、一次繊毛依存的なシグナル伝達や発生関連遺伝子プログラムと結び付いています。SUFU機能の破綻は、先天奇形や腫瘍形成過程に関与する異常なHedgehog経路活性と関連しており、Sufuはシグナル伝達制御の研究において広く用いられる重要なノードとなっています。Sufuを中心としたモデルは、細胞周期制御、分化、幹／前駆細胞の維持といったプロセスとの経路クロストークの解析にも有用です。

Su[fu] ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sufu 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sufu内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sufuの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sufuが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。