Stat1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400086-ACT

Lo STAT1 umano codifica Stat1, un fattore di trascrizione centrale nella segnalazione dell’interferone-α/β e dell’interferone-γ, attivato dalla fosforilazione mediata da JAK e attivo a valle dei recettori per le citochine. Una volta attivato, Stat1 dimerizza e trasloca nel nucleo per regolare i geni stimolati dall’interferone, che controllano la difesa antivirale, la presentazione dell’antigene, l’apoptosi e la limitazione del ciclo cellulare. STAT1 integra vie dell’immunità innata e adattativa, inclusa l’interazione con le reti di NF-κB e IRF, modulando le risposte infiammatorie e la sorveglianza immunitaria. Un’attività dis-regolata di STAT1 è implicata nella suscettibilità alle infezioni, nell’infiammazione cronica e in contesti di evasione immunitaria oncogenica, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per analizzare la segnalazione immunitaria e i programmi trascrizionali.

Stat1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat1 nelle cellule tumorali con espressione di STAT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.