Plasmide CRISPR d'Activation (h) STAM: sc-402697-ACT

La protéine humaine STAM (signal transducing adaptor molecule) est un adaptateur endosomal qui agit au sein du complexe ESCRT-0, en partenariat avec HGS/Hrs, pour reconnaître les cargos ubiquitinylés et coordonner le tri des récepteurs vers la dégradation lysosomale. Grâce à ses domaines VHS et SH3, STAM couple le trafic dépendant de l’ubiquitine à la modulation en aval de la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance et aux cytokines, influençant l’amplitude et la durée des voies MAPK et JAK/STAT. Cette régulation est au cœur de l’endocytose, de la maturation des endosomes et de la protéostasie, des processus fréquemment altérés dans la biologie des cancers et la signalisation immunitaire. Un renouvellement des récepteurs dépendant de STAM dérégulé a été associé à une persistance anormale des signaux et à une réponse cellulaire modifiée, faisant de STAM un point d’entrée utile pour analyser le dialogue entre trafic intracellulaire et signalisation.

STAM Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STAM Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STAM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STAM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STAM dans les cellules tumorales présentant une expression de STAM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.