SSX7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403553-ACT

SSX7 (sarcoma sinovial, ponto de quebra X 7) codifica uma proteína semelhante a um antígeno câncer-testículo dentro da família SSX, caracterizada por expressão normal restrita e por funções na regulação transcricional. Acredita-se que o SSX7 participe de processos associados à cromatina e da modulação de programas de expressão gênica que influenciam a identidade celular e a proliferação. A expressão desregulada de membros da família SSX tem sido associada a estados transcricionais ligados a tumores e à apresentação de antígenos imunogênicos, sustentando sua utilidade como marcador molecular na biologia do câncer. O estudo do SSX7 ajuda a elucidar mecanismos de controle epigenético, o equilíbrio entre repressão/ativação transcricional e a remodelação de vias a jusante em células transformadas.

SSX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SSX7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SSX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SSX7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SSX7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SSX7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SSX7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SSX7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SSX7 em células tumorais com expressão de SSX7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.