SSTR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401618-ACT

O receptor de somatostatina 2 (SSTR2) é um receptor acoplado à proteína G do tipo Gi/o (GPCR) que medeia as ações inibitórias da somatostatina sobre a secreção hormonal, a excitabilidade neuronal e a sinalização celular. Após a ligação do ligante, o SSTR2 inibe a adenilil ciclase, reduzindo a sinalização de cAMP/PKA, modula a atividade de canais iônicos e pode ativar vias associadas a MAPK/ERK e PI3K, com efeitos dependentes do contexto sobre proliferação e diferenciação. A internalização do receptor e sua reciclagem/dessensibilização por processos ligados à β-arrestina moldam ainda mais a dinâmica da sinalização e a responsividade celular. Alterações na expressão de SSTR2 são amplamente utilizadas como característica molecular na biologia neuroendócrina e em sistemas de modelos tumorais, apoiando estudos de tráfego de receptores, regulação endócrina e reconfiguração de redes de GPCR.

SSTR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SSTR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SSTR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SSTR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SSTR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SSTR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SSTR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SSTR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SSTR2 em células tumorais com expressão de SSTR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.