SSTR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403410-ACT

ソマトスタチン受容体1（SSTR1）は、Gi/o共役型のGタンパク質共役受容体（GPCR）であり、ソマトスタチンペプチドに結合してアデニル酸シクラーゼ活性を調節し、細胞内cAMPを低下させることで、下流のPKAシグナル伝達や転写応答を形成します。SSTR1の活性化はまた、状況依存的にイオンチャネルのコンダクタンスに影響を与えたり、MAPK/ERKおよびPI3K関連のシグナル伝達ノードを介した経路に関与したりして、細胞の興奮性、分泌、増殖プログラムに影響を及ぼします。ヒト組織においてSSTR1は、神経内分泌シグナル伝達や、内分泌系および神経系回路にまたがる調節性フィードバックに寄与します。ソマトスタチン受容体シグナルの異常は、神経内分泌・神経疾患の生物学に関連するモデルにおいて、ホルモン放出の変化や受容体依存的な増殖制御の変調との関連で研究されています。

SSTR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SSTR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SSTR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SSTR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSSTR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SSTR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSSTR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSSTR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSSTR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSSTR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。