SSTR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403410-ACT

O receptor de somatostatina 1 (SSTR1) é um receptor acoplado à proteína G (GPCR) ligado a Gi/o que se liga a peptídeos de somatostatina para modular a atividade da adenilato ciclase e reduzir o cAMP intracelular, moldando assim a sinalização a jusante de PKA e as respostas transcricionais. A ativação de SSTR1 também pode influenciar a condutância de canais iônicos e acionar nós de sinalização associados a MAPK/ERK e PI3K de maneira dependente do contexto, afetando programas de excitabilidade celular, secreção e proliferação. Em tecidos humanos, SSTR1 contribui para a sinalização neuroendócrina e para o feedback regulatório em circuitos dos sistemas endócrino e nervoso. A desregulação da sinalização de receptores de somatostatina tem sido estudada em relação a alterações na liberação hormonal e ao controle de crescimento dependente de receptor em modelos relevantes para a biologia de doenças neuroendócrinas e neurológicas.

SSTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SSTR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SSTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SSTR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SSTR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SSTR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SSTR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SSTR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SSTR1 em células tumorais com expressão de SSTR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.